绿化和病毒(绿色软件里边很多都带一个叫“绿化”的程序)

很多软件在安装时需要往Windows系统文件夹中放动态链接库（DLL文件），也需要往注册表里写信息，而很多软件所需的DLL是同名不同版本的，时间久了肯定会遇到冲突，系统就会不稳定。

绿色软件首先解决了往系统文件夹里写东西的问题，基本上软件运行的所有库文件和系统文件都会独立在一个文件夹中，所以能够实现不安装就直接运行的效果，也有利于系统稳定，所以称之为绿色。

但有一个问题没解决，就是注册表信息，所以通常会带一个绿化程序，执行后把信息写到系统注册表里，骗系统说该软件已安装，这样软件才能正常运行。通常从正规软件下载的大网站弄到的绿色软件是无害的，所以可以放心绿化，不明来路的绿化程序要慎用，免得招来木马和病毒。

园林绿化的概念以及彩叶植物在园林绿化中的相互关系

植原体、螺原体等无壁菌门的原核生物造成的植物病害与植物病毒产生的症状相似，无病症表现，因此，它们又叫病毒类似病害。花卉上比较常见的是植原体病害，因此我们介绍一下植原体病害的诊断和鉴定。

1 超薄切片，电镜下观察植原体

方法如植物病毒的超薄切片和电镜观察。

2 抗生素治疗诊断

用四环素、土霉素和金霉素等对受病植株进行叶面喷施和灌根，植原体对这几种抗生素敏感，病害症状可以得到缓解。而植物病毒对抗生素不敏感，如果施用，对病害无效。

3 植原体PCR检测

根据植原体的共同保守序列，用植原体16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2进行植原体直接PCR扩增，可扩增到植原体的特异扩增带。

还可以将直接PCR产物分别稀释40倍后，引物换为R16R2/R16F2进行巢式PCR扩增，可得到与引物设计相符的植原体的特异扩增带，说明为植原体病害。

这里以仙人掌植原体丛枝病的PCR检测为例，介绍植原体的PCR检测技术。

实验操作如下：

Ⅰ.总核酸提取

（1）取0.3g植株幼嫩组织，用液氮冷冻后充分研磨成粉状。

（2）移入含有0.6ml预热到60℃的CTAB DNA提取缓冲液中，在60℃水浴中温浴30min。

（3）加入等体积酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），抽提30min。

（4）12000r/min离心8min，取上清液，重复（3）、（4）步直至蛋白质除尽。

（5）加入氯仿∶异戊醇（24∶1），抽提30min，12000r/min离心8min，取上清液。

（6）加入等体积预冷的异丙醇及1/10体积的醋酸钠（3mol/L，pH5.2），混匀，-20℃保持至少30min，14000r/min离心10min，使核酸沉淀。

（7）用70%乙醇洗涤2次后，.真空干燥。

（8）沉淀溶解于100μl TE缓冲液中。

（9）取10μl DNA经0.7%琼脂糖凝胶电泳后观察结果，计算DNA浓度。其余于-20℃冰箱中保存备用。

Ⅱ.PCR扩增

参照Lee所报道的植原体16S rRNA基因通用引物对R16mF2/R16mRl序列和R16F2/R16R2序列合成引物，引物序列如下：

R16mF2：5′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′

R16mRl：5′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′

R16F2：5′-ACGACTGCTGCTAAGACTGG-3′

R16R2：5′-TGACGGGCGGTGTGTACAAACCCCG-3′

引物溶解于适量灭菌水中至终浓度为10μmol/L。

直接PCR（Direct-PCR）：

（1）取一PCR薄壁管，依次加入下列试剂

10×PCR反应缓冲液 5μl

5mmol/L MgCl2 4μl

2.5mmol/L dNTP 4μl

R16mF2（或R16F2） 3μl

R16mRl（或R16R2） 3μl

4U/μl 1TaqDNA聚合酶 1μl

模板 2μl

加入双蒸水至终体积为50μl，混匀并加入30μl石蜡油。

（2）PCR扩增。反应循环为95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸90s，35个循环后于72℃保温10min，4℃冰箱中保存。

（3）取5μl PCR产物于1%琼脂糖凝胶检测PCR扩增结果。

巢式PCR（Nested-PCR）：

将用引物对R16mF2/R16mRl扩增的直接PCR产物按1∶40比例稀释后，作为反应模板，引物对换为R16F2/R16R2，退火温度升高至60℃，其余反应条件同直接PCR。

Ⅲ.结果

用植原体16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2进行植原体直接PCR扩增，可扩增到一条约1.5kb的特异扩增带（图1）。通过实验，用泡桐丛枝作为植原体的阳性对照，检测出YNOl样品（仙人掌品种珊瑚枝丛枝）和YNO2（仙人掌品种堆罗汉丛枝）为植原体病害。其他YNO3（仙人掌品种猪耳掌丛枝）、YNO4（仙人掌品种金狮子丛枝病）、YNO5（仙人掌品种青海波丛枝）不是植原体病害，可能为品种的特性。

图1 直接PCR扩增结果

将直接PCR产物分别稀释40倍后，引物换为R16R2/R16F2进行巢式PCR扩增，可得到一条约1.2kb的特异条带，与引物设计相符（图2），说明为植原体病害。直接PCR的检测灵敏度为10pg DNA，而巢式PCR可以提高检测灵敏度。使用直接PCR的检测得到比较模糊条带的，使用巢式PCR可以得到非常明显的条带。

图2 巢式PCR扩增结果

园林绿化工程是建设风景园林绿地的工程。园林绿化是为人们提供一个良好的休息、文化娱乐、亲近大自然、满足人们回归自然愿望的场所，是保护生态环境、改善城市生活环境的重要措施。园林绿化泛指园林城市绿地和风景名胜区中涵盖园林建筑工程在内的环境建设工程，包括园林建筑工程、土方工程、园林筑山工程、园林理水工程、园林铺地工程`绿化工程等，它是应用工程技术来表现园林艺术，使地面上的工程构筑物和园林景观融为一体。

近年来中国从国外引进了许多彩叶植物，它们具有花朵一样绚丽的色彩，在春季盛花期过后与绿叶植物相互映衬，极大地丰富了城市的色彩，而且枝繁叶茂，易于形成大面积的群体景观，成为目前园林绿化美化的新宠。

关于彩叶植物的定义，从狭义上说，彩叶植物不包括秋色叶植物，它应在春夏秋三季均呈现彩色，一些彩叶裸子植物及亚热带地区的彩叶植物甚至终年保持彩色。广义上说，凡在生长季节叶片可以较稳定呈现非绿色（排除生理、病虫害、栽培和环境条件等外界因素的影响）的植物都可称作彩叶植物。它们是一类在生长季节或生长季节的某些阶段全部或部分叶片呈现非绿色的植物。彩叶植物或来自自然界的变异，或经人工育种、栽培选育而来。植物叶片色彩发生变化的原因很多，遗传的、生理的、环境条件、栽培措施甚至病虫害都可能造成植物叶色的改变。但只有叶片非绿色的变化稳定而有规律，才是形成彩叶植物的必要条件。例如，许多植物的彩斑和条纹是由于病毒引起的，但只要这些病毒不影响植物的正常生长，彩斑和条纹能够稳定出现，并通过繁殖使彩叶性状传递下去，就可以人为地加以诱导和利用，这也是目前彩叶植物育种的一个重要方面。另外，有选择地对一些彩叶突变加以保留和固定，也是培育彩叶植物的方法之一。

彩叶植物的种类很多。就色素分布来说，可以分为：（1）单色叶类：指叶片仅呈现一种色调，如**或紫色。（2）双色叶类：叶片的上下表面颜色不同。（3）斑叶类或花叶类：叶片上呈现不规则的彩色斑块或条纹。（4）彩脉类：叶脉呈现彩色，如红脉、白脉、黄脉等。（5）镶边类：叶片边缘彩色，通常为**。就色素种类来说，主要有以下几类：（1）黄（金）色类：包括**、金色、棕色等**系列。（2）橙色类：包括橙色、橙**、橙红色等橙色系列。（3）紫（红）色类：包括紫色、紫红色、棕红色、红色等。（4）蓝色类：包括蓝绿色、蓝灰色、蓝白色等。（5）多色类：叶片同时呈现两种或两种以上的颜色，如粉白绿相间或绿白、绿黄、绿红相间。

彩叶植物的呈色与组织发育年龄以及环境条件有密切关系。一般来说，组织发育年龄小的部分，如幼梢及修剪后长出的二次枝等呈色明显。如金叶女贞春季萌发的新叶色彩鲜艳夺目，随着植株的生长，中下部叶片逐渐复绿。对这类彩叶植物来说，多次修剪对其呈色十分有利。光照也是一个重要的影响因子，它从强度、光质和照射时间等几个方面影响花色素的合成及调节与花色素有关的酶的活性，从而影响彩叶植物呈色。有些彩叶植物，如金叶女贞、紫叶小檗，光照越强，叶片色彩越鲜艳。而一些室内观叶植物，如彩虹竹芋、孔雀竹芋等，只有在较弱的散射光下才呈现其斑斓的色彩，强光会使彩斑严重褪色。另一类彩叶植物，如金叶连翘、金叶莸等，叶色随光强的降低而逐渐复绿，在设施栽培中，如果持续使用75％的遮阴网10至15天，它们金色的叶片就会转绿。还有一些彩叶植物的叶色随光强的增加而趋暗，如紫叶黄栌、紫叶榛等，早春色彩鲜艳，在夏季强光照射下，原有的鲜艳色彩明显变淡。此外，温度、季节也会因影响叶片中花色素的合成而影响叶片呈色。一般来说早春的低温环境下，花色素的含量大大高于叶绿素，叶片的色彩十分鲜艳。而秋季早晚温差大和干燥的气候有利于花色素的积累，一些夏季复绿的叶片此时的色彩甚至比春季更为鲜艳。如金叶红瑞木，春季为金色叶，夏季叶色复绿，秋季叶片呈现极为鲜艳的红色，非常夺目。金叶风箱果秋季叶色从绿色变为金色，与红色果实相互映衬，十分美丽。

彩叶植物具有观花植物无可比拟的优越性，如果配置和应用得当，往往能够取得意想不到的效果。常见的应用方式有：

1.孤植彩叶植物色彩鲜艳，可发挥景观的中心视点或引导视线的作用。如株形高大丰满的紫叶梓树、金叶皂荚、金叶刺槐等，以及株形紧密的紫叶矮樱、花叶槭、紫叶石楠等都可以孤植于庭院或草坪中。